Purification & Aggregates

Proteinlerin ve biyolojik fonksiyonlarının ayrıntılı mekanistik çalışmalarını yürüten bilim insanları, düşük kaliteli materyalle çalışmayı göze alamazlar. Işık saçılımı, protein örneklerinin kalitesini ve saflığını değerlendirmek için iki farklı yöntem sunar: Dinamik ışık saçılımı (DLS) ve çok açılı ışık saçılımına bağlı boyut dışlama kromatografisi (SEC-MALS).

DLS, minimum örnek tüketimiyle (sadece 2 µL kadar az) bir protein çözeltisindeki agregasyon ve safsızlıkların hızlı, kalitatif tahminlerini elde etmek için mükemmel bir yöntemdir. Ayırma adımı gerekmez; sadece birkaç damlayı bir mikroküvete veya mikrokuyu plakasına pipetleyin ve saniyeler içinde bir boyut dağılımı elde edeceksiniz. Özellikle büyük alt mikron agregatlar, DLS ile kolayca tanımlanır, ayrıca polidispersite parametresi aracılığıyla çözünür agregatların varlığı da belirlenir. Toplu (fraksiyonlanmamış) DLS, ölçümde sadece birkaç mikrolitre kullanılmış olsa bile, değerli örneklerin geri kazanılmasına olanak tanır.

DLS, kaba boyut dağılımlarını (hidrodinamik yarıçaplar) ölçerken, dimerler ve trimerler gibi küçük agregatları ayırt etmeniz ve nicelendirmeniz veya safsızlıkların veya bozunma ürünlerinin doğru tanımlanmasını sağlamanız gerekebilir. SEC-MALS, çözeltide hangi proteinlerin ve bozunma ürünlerinin bulunduğuna dair güvenilir göstergeler elde etmek için mutlak molar kütle ölçümleriyle gerçek ayırmalar gerçekleştirir.